بررسی فراوانی E.coli O157:H7 در فرایند لاگون هوادهی ناقص Prevalence of E.Coli O157:H7 in partial aerated lagoon process فاضلاب شهری، تصفیه به روش لاگون هوادهی ناقص، اشرشیاکلی O157:H7، PCR دانشگاه علوم پزشکی ارومیه بستگی به نتایج طرح دارد - Monitoring and comparision of antibiotic resistance bacteria and their genes in municipal and hospital wastewater published 2014. - Ocurrence and correlation of antibiotic resistance gene in municipal and hospital wastewater published 2014. - Identification of clinically Antibiotic resistant genes aac(3)-IIa and aac(6’)-Ib in wastewater samples by Multiplex PCR 2015. - Evaluation of pollutant level and people exposed to CO in the Urmia city Iran published 2015. - Prevalence of antibiotic resistant genes in selected activated sludge processes in Isfahan Province Iran published 2016. - - Simple method for gold extraction from electrical and electronic wastes by using hydrometallurgical process accepted 2016. - - The effect of urban and hospital wastewater treatment on the rate of incidence and frequency of the bacteria and genes resistant to sulfonamides and erythromycin using Real Time PCR under review. - - The evaluation of safety of bottled waters by Heterotrophic plate count (HPC) bacteria underreview. - - Molecular Detection of Airborne Methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Hospital wards conferences published 2016. - - Molecular Tracking of Legionella bacteria in the partial aerated lagoon process by Nested PCR method conferences 2016. - Antibiotics in the environmentsconference published. - Comparison of prevalence and pattern of erythromycin and sulfonamide resistance bacteria and genes in hospital and municipal wastewaters under review. - Antibiotic resistance genes and environmental challenges.conferences. published. - Molecular detection of salmonella legionella and Ecoli in biosolids.Conference. published. - Detection of aac(3)-1 ، ctx-m-32 and cmlA1 resistance genes in environmental sources conference published 2015. - Application of real time PCR for efficiency of wastewater treatment plants.conferences.Accepted. - نقش فاضلاب های بیمارستانی در انتشار باکتریها و ژن های مقاوم آنتی بیوتیکی به محیط زیست، چاپ شده. - مقایسه بار آلودگی میکروبی آب‌های بطری شده در بسته‌های کوچک و بزرگ شهر گرگان در سال 94-1393 - آلودگی قارچی برخی از آب های بطری شده فروشگاه های مواد غذایی شهر گرگان در سال 94-1393، چاپ شده. - بهینه سازی فرایند تصفیه فاضلاب به روش SBR با استفاده از کمک منعقد کننده آهک با تاکید بر کاهش زمان هوادهی، چاپ شده. - تنوع ژنهای کد کننده مقاومت آنتی بیوتیکی در فاضلاب های شهری، چاپ شده - ارزیابی انتشار باکتریها و ژنهای مقاوم به گروه های آنتی بیوتیکی سولفونامید و اریترومایسین از تاسیسات تصفیه فاضلاب شهری و بیمارستانی با استفاده از تکنیک Real Time PCR، چاپ شده. - بررسی کارائی تصفیه خانه های فاضلاب در حذف باکتریها و ژنهای مقاوم آنتی بیوتیکی با استفاده از تکنیک Real time PCR، چاپ شده. - فراوانی ژنهای مقاوم به آنتی بیوتیک در منابع محیط، چاپ شده. - باقی مانده آنتی بیوتیکی و آلودگی ژنتیکی محیط زیست: مروری بر ژنهای کد کننده مقاومت نسبت به گروههای مختلف آنتی بیوتیکی در منابع محیطی ، چاپ شده. - نقش فاضلاب های بیمارستانی در انتشار باکتریها و ژن های مقاوم آنتی بیوتیکی به محیط زیست، چاپ شده. - ردیابی مولکولی باکتریهای سالمونلا، لژیونلا و اشرشیاکلی در لجن دفعی نهائی، چاپ شده. - امکان سنجی استحصال طلا از پسماند های الکتریکی و الکترونیکی(e-waste) با استفاده از روش هیدرومتالورژی، چاپ شده. - بررسي و تعيين شاخص های پرتوفرابنفش و ذرات معلق(PM10، PM2/5 و PM1)در استان زنجان در سال 1393، چاپ شده. - بررسی آلودگی قارچی استخرهای سرپوشیده شهر ایلام در زمستان، چاپ شده. - بررسی آنتروویروسها در لجن دفعی نهائی تصفیه خانه های شمال و جنوب اصفهان، منتشر شده. - مقایسه روش A-1 و روش استانداد تخمیر چند لوله ای برای شناسائی کلیفرم های مدفوعی، منتشر شده. - برسی وضعیت بهداشت محیطی رستورانها و هتلهای دارای سالن غذاخوری، منتشر شده. - تحلیل فضائی و سطح بندی بهداشتی استخرهای شنا با استفاده از GIS ، منتشر شده. - مواد زائد الکترونیکی، چالشی نوظهور در عرصه مدیریت بهداشت محیط، منتشر شده. - ساختار مندی مدیریتی پسماند های الکترونیکی در کشور های در حال توسعه: ضرورت قرن 21،کنفرانس، منتشر شده. - طراحی و ساخت دستگاه بازیافت لامپ فلورسنت،کنفرانس، منتشر شده. - توانمندیهای نانوفناوری در بازیابی آبهای زائد،کنفرانس، منتشر شده. - بازیافت فلزات ارزشمند از پسماند های الکتریکی و الکترونیکی(طرح-اتمام) - بررسی شاخص ها و پاتوژنهای لجن دفعی نهائی(طرح- اتمام یافته) - شناسائی انتروویروسها در لجن دفعی نهائی(طرح- اتمام یافته) - بررسی الگوی مقاومت آنتی بیوتیکی و ژنهای مقاوم باکتریایی در فاضلاب های شهری و بیمارستانی(طرح- اتمام یافته) - راه اندازی اولین مرکز امحاء و بازیافت انواع لامپ های فلورسنت( طرح فناورانه- اتمام فاز اول- فعال) - طراحی تصفیه خانه های فاضلاب(کتاب- چاپ شده) - راهنمای مدیریت پسماند های الکتریکی و الکترونیکی( کتاب- در روند چاپ) - قران و علوم مدرن(کتاب- چاپ شده) - بهداشت مساجد(کتاب- چاپ شده) - فاضلاب های رنگی(کتاب- چاپ شده) - اپیدمیولوژی محیط زیست(کتاب- در روند چاپ) - و .... روش اجراء طرح (Summary of methodology) : در این پژوهش بر مبنای مکان های نمونه برداری(8 محل نمونه برداری) و تحقیقات قبلی 32 نمونه از بخش های مختلف تصفیه خانه فاضلاب شهری خوی( ورودی، خروجی لاگون اول، خروجی لاگون دوم، خروجی لاگون سوم، خروجی زلال ساز، خروجی واحد گندزدائی، خروجی تصفیه خانه و محل تخلیه پساب به رودخانه پائین دست) به روش تلفیقی( لحظه ای- زمانی و ترکیبی)، با تناوب ماهیانه(به مدت 4 ماه) برداشت می شود و پس از کنترل پارامترهای فیزیکی و با رعایت شرایط استاندارد به آزمایشگاه تحقیقاتی گروه مهندسی بهداشت محیط انتقال داده می شوند. پس از آماده سازی نمونه ها مراحل کار جهت بررسی فراوانی اشرشیاکلا O157:H7 در فاضلاب تصفیه خانه شهری خوی با استفاده از روش لاگون هوادهی ناقص بصورت زیر انجام می گیرد: بخش اول: جمع آوری و استخراج نمونه ها ازواحد های مختلف فرایندی تصفیه خانه و پساب خروجی: برای جلوگیری از تاثیر نقطه نمونه برداری 10 نمونه 100میلی لیتری برداشت و به یک بطری استریل یک لیتری تحت شرایط دمائی کنترل شده(4 درجه) منتقل می شود. استخراج DNA بر اساس راهنمای کیت مصرفی انجام می شود. قبل از استخراج ممکن است مرحله لیز برای افزایش اطمینان استخراج انجام می شود. برای مثال استفاده از فریز-تاو( پنج تا 7 بار) و یا استفاده از بافر لیز کننده و محلول K پروتئیناز( درجه حرارت 65 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه) انجام می شود. DNA استخراج شده تا زمان آزمایش در 20- نگهداری می شود. بخش دوم: انجام آزمایش PCR آماده سازی: حجم نهایی مورد استفاده برای هر واکنش PCR برابر 20 میکرولیتر که 11 میکرولیتر پرمیکس (شامل بافر ، dNTP وTaq DNA polymerase )، پرایمر فوروارد و ریورز(سکانس های مورد استفاده فوروارد GGC GGA TTA GAC TTC GGC TA و ریورز CGT TTT GGC ACT ATT TGC CC خواهد بود) هر کدام 0.2 میکرومولار، 1میکرولیتر DNA الگو و 7.6 میکرولیتر آب مقطر اضافه می شود(14). برنامه PCR: اپتیمایز کردن پرایمر ها با استفاده از برنامه مقابل انجام می شود: دناتوراسیون اولیه oC 94 ، 1 دقیقه و سپس 35 سیکل، دناتوراسیون oC 94 ، 30 ثانیه، دمای اتصال oC 55 ، 30 ثانیه و دمای گسترش oC 72 ، 30 ثانیه و دمای گسترش نهائی oC 72 ، 5 دقیقه. جهت تشخیص و بررسی محصولات PCR عمل الکتروفورز بر روی ژل آگاروز 5/1 درصد در 100 ولت بمدت 20 دقیقه انجام می گیرد. برای مشاهده حرکت DNA روی ژل از دستگاه آشکارساز UV استفاده می گردد(14). باکتری اشرشیا کلای (E.coli) فراوان ترین و مقاوم ترین پاتوژن قابل انتقال از طریق آب می باشد که از آن به عنوان ارگانیسم شاخص به منظور نشان دادن وجود فاضلاب دفعی انسان در آب استفاده می شود (1). اکثر گونه های این باکتری، فلور طبیعی مجرای گوارشی انسان و حیوان می باشند. در صورتی که برخی گونه های آن با کسب فاکتورهای ویرولانس به انواع پاتوژنیک تکامل یافته (2) و در نتیجه منجر به انواع بیماری های روده ای و مسمومیت غذایی انسانی می شوند (3). در بین سویه های اشرشیا کلای ایجاد کننده اسهال، سویه های انتروهموراژیک تولید کننده شیگاتوکسین (EHEC/STEC)، به دلیل توانایی ایجاد بیماری های شدید برای انسان متمایز هستند. این سویه ها، با تولید یک یا چند نوع توکسین شیگا (stx1 یا stx2)، از سنتز پروتئین در سلول میزبان جلوگیری نموده و باعث مرگ سلول می شوند (4). یکی از سروتایپ های EHEC که دائما با بیماری های انسانی در ارتباط است، اشرشیا کلای O157:H7 می باشد. این سروتایپ مهم ترین عامل پاتوژن بیماری های آب و مواد غذایی در سطح دنیا در 20 سال گذشته بوده است (5). عفونت های ناشی از این باکتری می تواند طیف بالینی گسترده ای از موارد بدون خطر تا مرگ را شامل شود (6). بنابر آمار مرکز کنترل و پیشگیری بیماری ها (CDS) ، عفونت های ناشی از باکتری اشرشیا کلای O157، هرسال منجر به 73000 مورد بیماری، 2200 مورد بستری و 60 مورد مرگ در ایالات متحده می شود (7). هر چند مخازن مهم باکتری اشرشیا کلای O157، گوشت گاو و فراورده های لبنی آن می باشد (8)، با این وجود، فاضلاب های حیوانی و فاضلاب های انسانی، امکان انتقال بالقوه این پاتوژن میکروبی به منابع آبی را فراهم می کند. هم چنین به دلیل این که از فاضلاب ها به طور فزاینده ای در ابیاری محصولات کشاورزی استفاده می شود، در صورت عدم حذف، این محصولات نیز آلوده خواهند شد (9). بنابراین انتقال از طریق آب های الوده مسیر مهم دیگری در شیوع بیماری های ناشی از این سویه باکتریایی به شمار میرود. به طوری که مطالعات حوزه میکروبیولوژی، اپیدمیولوژی وپساب های تصفیه خانه های فاضلاب ثابت کرده اند که بین باکتری اشرشیا کلای O157:H7 و آلودگی آب های تفریحی، آشامیدنی، آبیاری و فاضلاب ها ارتباط وجود دارد (10). بنابراین با توجه به اینکه آب می تواند یک منبع مستقیم ( آشامیدنی) و غیر مستقیم ( آب آبیاری) باکتری اشرشیا کلای O157:H7 باشد، کنترل منابع آبی به منظور پیشگیری از بیماری های مرتبط با این باکتری، با نظارت مستمر بر این منابع امکان پذیر می باشد. مطالعات مختلف در ایران در حوزه کلینیکی نشان داده اند این عامل در ایجاد اسهال خونی در کشور نقش مهمی دارد. بررسی این عامل در منابع محیطی به خوبی صورت نگرفته لذا در این مطالعه که بصورت توصیفی- تحلیلی می باشد، این عامل را در تصفیه خانه فاضلاب به روش لاگون هوادهی ناقص در شهر خوی مورد بررسی قرار خواهد داد. 4 aali1400@gmail.com 1395-01-42-2708 2017-08-08 2016-12-30 0 با استفاده از نرم افزار Excel و Spss version18 ، داده ها پس از گرداوری با استفاده از Spss و ازمون های آماری توصیفی با ضریب اطمینان 95% مورد تجزیه و تحلیل قرار می گیرند. بررسی فراوانی E.coli O157:H7 در تصفیه خانه فاضلاب به روش لاگون هوادهی ناقص نتایج این مطالعه می تواند مسئولان شرکت آب و فاضلاب را در بهینه سازی بخش های مختلف تصفیه خانه بویژه واحد گندزدایی یاری رساند. - فراوانی اشرشیاکلی O157:H7 در فاضلاب خام ورودی به تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی چگونه است؟ - فراوانی اشرشیاکلی O157:H7 در پساب خروجی تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی چگونه است؟ - درصد اشرشیاکلی O157:H7 به تفکیک بخش های مختلف تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی چگونه است؟ - جنبه های طراحی و مهندسی لاگون های اول و دوم و سوم در مقایسه با درصد اشرشیاکلی O157:H7 .چگونه است؟ 1. Stevens M Ashbolt N Cunliffe D. Recommendations to Change the use of coliform as microbial indicators of drinking water quality. Canberra: Biotext Pty Ltd; 2003. 2. Kaper JB Nataro JP Mobley HL. Pathogenic Escherichia coli. Nat Rev Microbiol. 2004; 2: 123-140. 3. Xia X Meng J McDermott P Avers S Blickenstaff K Tram T et al. Presence and characterization of shiga toxin-producing Escherichia coli and other potentially diarrheagenic e.coli in retail meat. Appl Environ Microbiol. 2010: doi: 10.1128/AEM.01968-09 1-34. 4. Islam MA Mondol AS Boer E Beumer RR Zwietering MH Talukder KA et al. Prevalence and genetic characterization of shiga toxin-producing Escherichia coli isolates from slaughtered animals in Bangladesh. Appl Environ Microbiol. 2008; 74 (14): 5414-5421. 5. Wau VCH Chenb SH Lin CS. Real-Time detection of Escherichia coli O157:H7 sequences using a circulating-flow system of quartz crystal microbalance. Journal Biosensors and Bioelecteronics. 2007; 22: 2967-75. 6. Banatlava N Griffin PM Greene KD Barrett TJ Bibb WF Green JH Wells JG. The united states national prospective hemolytic uremic syndrome study: Microbiological serologic clinical and epidemiologic findings. J Infect Dis. 2007; 183: 1063-1070. 7. Mead PS Slutsker L Dietz V McCiag LF Bresee JS Shapiro C Griffin PM Tauxe RV. Food-related illness and death in the united states. Emerg Infect Dis. 1999; 5: 607-625. 8. Elder RO JE Keen GR Siragusa GA Barkocy-Gallagher et al. Correlation of enterohemorrhagic Escherichia coli O157 prevalence in feces hides and carcasses of beef cattle during processing. Proc Natl Acid Sci USA 97: 2999-3003. 9. Ibekwe AM Watt PM Grieve CM Sharma VK et al. Multiplex fluorogenic Real-Time PCR for detection and quatification of Escherichia coli O157:H7 in dairy wastewater wetlands. AEM. 2002; 68: 4853-4862. 10. Shelton DR JA Higgins JAS Van Kessel YA Pachepsky et al. Estimation of viable Escherichia coli O157:H7 by using enrichment in conjuction with immunological detection. J Microbiol Methods. 2004; 58: 223-231. 11. Spano G Beneduce V Terzi AM Stance AM et al. Real-Time PCR for the detection of eschercia coli O157:H7 in dairy and cattle wastewater. Letters in Applied Microbiology. 2005; 40: 164-171. 12. Ravva SV Sarreal CZ Duffy B and stanker LH. Survival of Escherchia coli O157:H7 in wastewater from dairy lagoons. Journal of Applied Microbiology. 2006; 101: 891-902. 13. Atabakhsh P Amin MM Mortazavi H Yaran M et al. Indentification of total and fecal coliforms and heterotrophic to microbiological method and E.coli O157:H7 to immunological and Real Time PCR methods in Isfahan water treatment plant. Iran J Health and Environ. 2010; 3: 3. 50 0 0 0 - فراوانی اشرشیاکلی O157:H7 در فاضلاب خام ورودی به تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی - فراوانی اشرشیاکلی O157:H7 در پساب خروجی تصفیه خانه - فراوانی اشرشیاکلی O157:H7 در فاضلاب خام ورودی به تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی - فراوانی اشرشیاکلی O157:H7 در پساب خروجی تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی - تعیین درصد اشرشیاکلی O157:H7 به تفکیک بخش های مختلف تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی - مقایسه درصد اشرشیاکلی O157:H7 به تفکیک بخش های مختلف تصفیه خانه فاضلاب به ر وش لاگون هوادهی ناقص شهر خوی - تعیین اثر و مقایسه جنبه های طراحی و مهندسی لاگون های اول و دوم و سوم با درصد اشرشیاکلی O157:H7 . -1 19 -1 1 - Spano و همکاران (2004) مطالعه ای را با هدف ردیابی باکتری اشرشیا کلای O157:H7 در فاضلاب های گاوی و لبنی با استفاده از تکنیک Real-time PCR انجام دادند. طی این تحقیق مشخص شد که با تلقیح حداقل 10-4 CFU ml-1 (CFU یا واحد تشکیل کلنی) از سویه اشرشیاکلای O157:H7 به نمونه های فاضلاب، می توان این پاتوژن باکتریایی را ردیابی کرد(11). - مطالعه ای با هدف بررسی بقای باکتری اشرشیاکلای O157 در فاضلاب های لبنی با استفاده از روش لاگون های در محل و در حضور و عدم حضور سیستم های گرداننده هوا توسط Ravva و همکاران (2006) انجام گردید. دراین مطالعه از فاضلاب های جمع آوری شده از لاگون های لبنی مرکز کالیفرنیا استفاده شد. در این تحقیق مشخص شد که باکتری اشرشیا کلای O157:H7 قادر به بقا و تکثیر در این فاضلاب ها نمی باشد(12). - در سال 2010 مطالعه ای توسط عطابخش و همکاران آن به منظور شناسایی کلی فرم های کل و گوارشی و هتروتروف ها به روش میکروبیولوژی و اشرشیاکلای O157:H7 به روش های ایمنولوژیک و Real-Time PCR در تصفیه خانه آب اصفهان انجام گردید. در این مطالعه ثابت شد که سویه های بیماری زای O157:H7 در لجن حوضچه های ته نشینی تصفیه خانه آب اصفهان وجود داشت. عدم وجود این سویه در آب خروجی، حاکی از ان است که فرایندهای موجود در واحد های تصفیه خانه قادر به حذف این باکتری قبل از رسیدن به مراحل نهایی می باشد(13). - Mark و همکاران (2002) مطالعه ای را با هدف ردیابی و تعیین غلظت باکتری اشرشیاکلای 157:H7 با استفاده از تکنیک Multiplex fluorogenic Real-Time PCR در تالاب فاضلاب های لبنی انجام دادند. آنها در این مطالعه دریافتند که اشرشیاکلای O157:H7 در تمام فصول سال در فاضلاب ها وجود دارد. هرچند بالاترین و پایین ترین غلظت باکتری به ترتیب در ماه های آوریل و سپتامبر می باشد(9). 0 rezayatname.doc 0 1 0 1 0 1 0 -1 0 0 0 0 0 1 19700000 0 0 1 0 2017-05-13 0 منطقه ای 1 1 1 -1 1 1 2 1 2017-01-06 0 0 0 1 1 -1 0 3 8 8 4